细胞划痕（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。其实验原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央的细胞，然后继续培养细胞至设定时间（采用无血清或低血清（<2%）排除细胞增殖的影响），取出培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力。通常设定正常对照组与实验组，实验组中添加某些处理因素或药物、外源性基因等，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，判断比较各组细胞的迁移与修复能力。

条件好的实验室可以使用活细胞成像来分析创伤愈合实验中角质形成细胞或者成纤维细胞的迁移活动。结合包含的软件分析算法，有可能延迟量化间隙表面关闭和关闭推移时间的速度。使用延时显微镜获取数据的优点是，可以在恒温箱内确定和稳定的条件下记录伤口分析。

通常，用于伤口愈合试验的细胞类型旨在重建表皮的再生特征。永生化的细胞系和原代细胞经常被用作这方面的模型。蕞常用的细胞类型是角质形成细胞和成纤维细胞。

细胞划痕实验步骤：

1、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

2、 在孔中加入约5×105个细胞，培养细胞至汇合度达到90%以上。

3、用头比着直尺，垂直于背后的横线划痕。

4、 PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。

5、放入37℃ 5% CO2培养箱培养。按0，12，24，48h时间点取样，100倍镜下拍照。如果细胞迁移（修复）能力较强，需相应缩短观察时间间隔。

6、结果分析：对不同时间点不同处理分组的划痕间距进行分析。

细胞划痕实验注意事项：

1. 细胞的密度；划痕实验一般是几种细胞的结合，但是每种细胞的生长速度会不一样，所以需要按照细胞的生长特性调整培养时间，细胞铺满孔底时划痕的效果会比较好，建议是100%的铺满。

2. 用枪头画线时尽量垂直，以6孔板为例 ，一个孔可以画6条线

3. 画线之后一定要用PBS洗两次，以去除划下的细胞

4. 注意培养方式一定要改成无血清或者低血清的培养基，因为：划痕后用无血清培养基培养细胞，意在说明在监测的 24 小时内，划痕的缩小是细胞 迁移作用的结果，所以要将细胞增殖造成细胞迁移的影响降到蕞低；但若细胞改成无血清培养后大面积漂浮，需要适量加入血清浓度不能高于2%。

5.放入37℃ 5% CO2培养箱，培养。可按0，10，12，15时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。

6.统计方法：使用Image J软件打开图片后，抓取自己画的线条，计算细胞间距离的平均值。