【实验原理】

细胞增殖/毒性检测试剂盒（CCK-8 法）是基于高度水溶性的四唑盐 WST-8（2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2，4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐）来进行测定的。WST-8 在电子介体的作用下可还原生成水溶性甲瓒产物，产生颜色反应。CCK-8 是非放射性的，可在细胞增殖和细胞毒性实验中，对活细胞进行灵敏的比色测定，从而计算出细胞数量。WST-8 被细胞中的脱氢酶还原而生成橙色产物（甲瓒），可溶于组织培养基中。细胞中脱氢酶产生的甲瓒产物的量与活细胞的数量成正比。

【实验方法】

a. 细胞计数方案

1)在 96 孔板中接种细胞悬液（100 μL/孔）。将板在潮湿的培养箱中预先培养（例如 37℃，5% CO2）；

2)在平板的每个孔中加入 10 μL CCK-8 溶液，注意不要将气泡引入孔中，因为它们会干扰 OD 值读取；

3)在培养箱中将平板孵育 1-4 h；时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定；

4)使用酶标仪测量 450 nm 处的吸光度。

b. 细胞增殖/毒性检测方案

1)在 96 孔板中接种 100 μL 细胞悬液（5×103 个细胞/孔）。将板在潮湿的培养箱中预培养 24h（例如 37℃，5% CO2）；

2)在平板中加入 1-10 μL 各种浓度的待测物质； 3. 在培养箱中将平板孵育适当的时间（例如 6、12、24 或 48 h）； 4. 向板的每个孔中加入 10 μL CCK-8 溶液，注意不要将气泡引入孔中，因为它们会干扰 OD 值读取； 5. 在培养箱中将平板孵育 1-4 h；时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定； 6. 使用酶标仪测量 450 nm 处的吸光度。

【常见问题与注意事项】

1)由于 CCK-8 分析基于活细胞中脱氢酶活性的检测，因此影响活细胞中脱氢酶活性的条件或化学物质可能会导致实际活细胞数与使 用 CCK-8 分析确定的细胞数之间存在差异；

2)混合或重悬组分时，避免产生气泡，因为它们会影响 OD 值读取；

3)孵育时间因孔中细胞的类型和数量而异。通常，白细胞着色较弱，因此可能需要较长的孵育时间（最多 4 h）或大量细胞（~105 个细胞/孔）；

4)如果由于长期培养而改变了培养基的颜色或 pH，请在添加 CCK-8 时更换培养基；

【交付标准】

1.  实验报告 

2. 真实实验结果

3. 原始图片

4. 实验原始数据

5. 剩余物料在周期内可返还（超过周期，不予返还）

康旭禾生物提供包括动物实验、细胞实验、分子实验、病理实验、流式检测实验及论文翻译、润色、投稿辅助等相关的各项服务。

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