2013年，单细胞测序技术被Nature Methods杂志评选为年度技术。2019年，单细胞多组学技术再次被 Nature Methods杂志评选为年度技术。进一步说明单细胞测序未来在基础科研乃至医学、农学等各个应用研究领域具有无限的潜力，将是未来科学发展的重要方向。我们一起来回顾一下单细胞测序技术发展史。

01

第一代测序技术

●时间：1970

●方法：基于DNA序列的测定方法，如引物延伸测序。

●特点：测序精度接近100%，但成本高、通量低。

●代表技术：Sanger测序法。

02

第二代测序技术

●时间：2000

●方法：高通量测序，可一次性测定数十万至数百万个DNA分子。

●特点：降低了测序成本，提高了通量，但仍然依赖于电泳分离技术。

●代表技术：

 Illumina平台：如Hiseq和Novaseq。

 Solexa平台：如Solexa Sequencing Platform。

03

第三代测序技术

●时间：2010

●方法：单细胞测序技术，包括边合成边测序（SBS）和纳米孔测序技术。

●特点：解决了读长短的问题，能够直接对RNA和核酸修饰进行检测。

●代表技术：

PacBio平台：如SMRT技术。

Nanopore平台：如Nanopore Technologies的MinION。

PART 01

plate-based SMART-seq

先用使用流式细胞仪或显微操作进行细胞分选，裂解细胞，用SMART技术建立库（使用Oligo(dT) primer对带有polyA尾的RNA进行逆转录，所使用的MMLV酶在5'末端加C后，会继续反过来合成DNA的另一条链（模板置换），由此形成双链cDNA；在两端加上PCR引物后，进行PCR扩增。

PART 02

DNA建库方法

用酶将cNDA打碎成小片段，添加接头用于后续测序，PCR扩增，完成建库。

PART 03

Dropseq

DropSeq基于液滴微流控技术，首先，将细胞悬浮液与带有分子条形码的微珠悬浮液泵至微流控芯片，汇聚并形成层流，之后再与油相汇聚，形成单分散的微滴，将每个细胞与一个微珠一同包裹于同一微滴中，随后完成RNA杂交并裂解微滴，释放mRNA杂交物，完成逆转录，最后，以PCR方式完成核酸扩增，并进行测序分析。但该方法有个缺点，不能保证每个液滴中都有且仅有一个单细胞和一个磁珠。

PART 04

10X Genomics

这项技术整合了之前的技术，并做了改进。通过10×genomics仪器将单个细胞与单个凝胶微珠通过油相混在一起，形成油包水的小微滴，接下来把细胞膜破掉，让细胞当中的mRNA游离出来。游离出来的mRNA与小液滴中的水相混合，和逆转录酶、结合在凝胶微珠上的核酸引物、以及dNTP底物相接触，进行逆转录反应。mRNA与凝胶微珠上带barcode的DNA分子相结合，在逆转录酶的作用下，逆转录出cDNA来。barcode的作用是方便后续测序时辨认样本来源。

PART 05

 微 孔 法 

BD Rhapsody™平台采用微孔捕获技术，其扩增和测序部分与10X Genomics一样，主要区别在于主要在于捕获单细胞。其捕获应用到蜂巢板，将细胞悬液平铺在只能容纳一个细胞的蜂窝里，蜂窝里有磁珠。随后，Beads 同样由注入孔注入，即可在单个反应孔中捕获其中的细胞。其Beads上的序列结构也与10X Genomics 相似。

2000㎡生物实验室

如有实验技术问题，可咨询我们

电话：19379182007   

网站：http://consurebio.com/

（扫码添加微信）

主营项目

1

动物实验

动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等

2

细胞实验

CCK8/MTT、原代细胞分离、流式细胞实验、细胞划痕、侵袭、迁移、EDU染色、转染、稳定株

3

分子生物学

PCR检测、荧光定量PCR、绝对定量PCR、端粒酶长度、pull down、双荧光素酶、SSR、SNP检测等

4

蛋白实验

WB、Co-IP、酵母双杂

5

病理实验

HE染色、免疫组学、电镜

6

生理生化实验

肝肾功能、抗氧化、免疫反应等生理免疫指标;动植物营养指标、微量元素、重金属、酶活等。

7

多组学实验

基因组、转录调控、蛋白组、代谢组、微生物多样性、宏基因组、生信分析

8

整体课题实验

方案设计、整体实验交付、标书写作、论文润色、协助投稿

END

联系我们

康旭禾生物提供包括动物实验、细胞实验、分子实验、病理实验、流式检测实验及论文翻译、润色、投稿辅助等相关的各项服务。

联系方式：19379182007      

公司官网：http://consurebio.com/

公司地址：江西省南昌市南昌县小蓝VR产业基地D座2楼