在生物医药领域，基因转染是一种常见的实验技术，用于将外源基因导入细胞中。然而，要想成功地进行稳定转染并筛选出阳性细胞株，选择合适的筛选抗生素至关重要。本文将详细介绍如何选择稳定转染的筛选抗生素。

通常构建的载体上有两个抗性基因，如，氨苄青霉素（Amp）和、新霉素抗性基因(neo)。

那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来筛细胞呢？

很多真核表达质粒上都有两个抗性基因，但一般其中只有一个抗性可以用来筛细胞。其中氨苄青霉素对细胞是没有筛选作用的，这是用于构建克隆时筛选细菌的。所以这种情况下只能用G418。细胞转染后用G418来加压筛选，其原因是在载体上具有新霉素的抗性基因，当载体被转染入细胞后，由于细胞拥有了抗新霉素的特性，因此在用新霉素加压时，阳性细胞就不会被G418杀死。相反，未被转染入载体的阴性细胞由于没有对新霉素的抗性，那么当使用G418加压时，当然就会被杀死。

如图，这个载体就是两个抗性，Amp和neo

但两个抗性的本质区别在哪？

Amp是在bla启动子驱动下表达，bla是原核表达启动子。在大肠杆菌可以表达，因此，转化后的质粒用Amp可以筛选到，而不用G418筛选。而neo是在SV40启动子驱动下表达。SV40是真核表达启动子，转入真核细胞表达。所以只有转入载体的细胞才能用G418筛选出来。

G418是一种氨基糖苷类似物，它通过干扰核糖体功能来阻止哺乳动物细胞蛋白质的合成。

因此在筛选过程中G418的浓度将对转染细胞的筛选产生很大的影响。在筛选之前最好进行条件优化确定最佳筛选浓度。尽管文献有报道筛选浓度，最好还是要自己亲自做一下筛选浓度的确定。一般来说，筛选浓度越高，筛选时间越长，阳性细胞的筛选率越高。但是，过高的筛选浓度或过长的筛选时间可能会对细胞造成毒性，导致细胞生长缓慢或死亡。因此，您需要根据您的实验需求和细胞生长情况，选择合适的筛选浓度和时间。另外，为了确保筛选的可靠性和重复性，建议在正式实验前进行预实验，以确定筛选的最佳条件。

还可以用其他的抗生素吗？

用于阳性细胞筛选的还可能有潮霉素（标有Hyg),等等。根据载体中所含有的抗性基因进行选择。

比如：1 pBlast 质粒 具有氨苄青霉素和Blast抗性，筛细菌时用氨苄青霉素，筛细胞时用Blast；2 pZeocin质粒 具有卡那霉素和Zeocin抗性，筛细菌时用卡那霉素，筛细胞时用Zeocin。

如有实验技术问题，可咨询我们

电话：15579126092  

网站：http://consurebio.com/

主营项目

1. 动物实验

动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等

2. 细胞实验

CCK8/MTT、原代细胞分离、流式细胞实验、细胞划痕、侵袭、迁移、EDU染色、转染、稳定株

3. 分子生物学

PCR检测、荧光定量PCR、绝对定量PCR、端粒酶长度、pull down、双荧光素酶、SSR、SNP检测等

4. 蛋白实验

WB、Co-IP、酵母双杂

5. 病理实验

HE染色、免疫组学、电镜

6. 生理生化实验

肝肾功能、抗氧化、免疫反应等生理免疫指标;动植物营养指标、微量元素、重金属、酶活等。

7. 多组学实验

基因组、转录调控、蛋白组、代谢组、微生物多样性、宏基因组、生信分析

8. 整体课题实验

方案设计、整体实验交付、标书写作、论文润色、协助投稿

联系我们

康旭禾生物提供包括动物实验、细胞实验、分子实验、病理实验、流式检测实验及论文翻译、润色、投稿辅助等相关的各项服务。

联系方式：15579126092      

公司官网：http://consurebio.com/

公司地址：江西省南昌市南昌县小蓝VR产业基地D座2楼