在国自然项目中,细胞实验一般都是必选项,在功能和机制实验中通常都要涉及。但越是“常规”实验,设计严谨就越难,下面就尽量详细说明要考虑的因素。
要设计一个严谨且有效的细胞实验,可以遵循以下步骤
PART 01确定实验目的
首先,明确您的实验目的。不同的研究目标可能需要不同类型的细胞。例如,如果研究乳腺癌,您可能需要特定的乳腺癌细胞系,如T47D用于管腔型乳腺癌,或MDA-MB-468用于三阴性乳腺癌。
选择适当的细胞系或原代细胞
1. 细胞系
这些是已建立的培养细胞系,如乳腺癌细胞系T24。细胞系具有固定的遗传特性,适用于快速、可重复的实验。但需注意细胞系的遗传背景与您研究的生理或病理状态是否相符。
2. 原代细胞
直接从组织分离获得,更贴近自然生理状态,适用于研究细胞间的相互作用和药物的原始效应。但原代细胞的获取和培养相对复杂,且传代次数有限。
3. 考虑细胞的来源和纯度
确保所选细胞系或原代细胞经过充分的鉴定,确认其纯度和特性。避免使用可能被污染或交叉污染的细胞。
4. 细胞系的对应性
选择与实验需求相匹配的细胞系。例如,如果您研究肿瘤的转移,选择具有转移能力的细胞系更为合适。同时,考虑细胞系的遗传背景,以确保实验结论的普遍适用性。
5. 获取和鉴定原代细胞
原代细胞的获取可能较为复杂,但它们能更真实地反映体内环境。获取后应进行充分的鉴定,如形态观察、特定标记物的免疫荧光染色等。
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1. 动物实验
动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等
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CCK8/MTT、原代细胞分离、流式细胞实验、细胞划痕、侵袭、迁移、EDU染色、转染、稳定株
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PCR检测、荧光定量PCR、绝对定量PCR、端粒酶长度、pull down、双荧光素酶、SSR、SNP检测等
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基因组、转录调控、蛋白组、代谢组、微生物多样性、宏基因组、生信分析
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